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    直播答疑 | 原代細胞培養常見問題解決方案

    更新時間:2022-09-30  |  點擊率:812

    原代培養是指由體內取出組織或細胞進行的首-次培養,也叫初代培養,是細胞系建立的第一步。

    在9月22日開播的“原代細胞常見問題解決方案"課程中,有很多老師就原代細胞培養問題提出了疑問。我們篩選出部分代表性問題,并作了詳細解答。


    臍靜脈內皮細胞需要包被嗎?選用什么包被比較好?

    臍靜脈內皮細胞建議包被,建議選用0.1%明膠包被,包被的細胞形態會比不包被的好看。


    角質細胞需要包被嗎?

    角質細胞生長類似上皮細胞,營養環境要求高,建議使用膠原蛋白包被。


    細胞原皿狀態很好,傳代后細胞邊界不清楚是什么原因?感覺虛化的很快。

    傳代后邊界不清晰,考慮細胞是否需要外基質條件,嘗試包被培養瓶;其次考慮細胞是否老化、分化。


    請問真菌污染了怎么辦?就丟了這瓶細胞嗎?

    真菌污染細胞,建議丟棄,避免對其他細胞造成交叉污染,損失更大;若要挽救,建議隔離培養,加兩性-霉素B等抗生素,每天換液,持續清除,但只能維持幾周,后續培養會反復爆發,耗費成本更高。


    支原體污染會改變細胞的形狀嗎?細胞里面也有很多小碎片,這該怎么辦?用抗支原體藥可以去除細胞外碎片,但是細胞里的無變化。

    污染較輕的,不會影響細胞狀態,出現大量碎片,細胞內部也有碎片,污染就很嚴重了,支原體清除試劑對外部清除有效,內部較難清除;同時在細胞內部已損傷情況下,沒有必要清除,此時細胞已經喪失很多功能,建議廢棄。


    肝細胞培養中包被對其影響大嗎?

    肝細胞營養環境要求較高,建議包被,不包被影響貼壁率(低于50%),長時間培養不包被會導致細胞卷曲聚團,影響狀態。


    原代人牙周膜細胞凍存復蘇后貼壁很少且生長很慢,怎么處理呢?

    原代細胞復蘇貼壁少,生長慢,首先是調整細胞密度保持在70%以上,確保生長狀態,其次選用高質量血清或培養基進行補救,也可以補加5%血清。


    小鼠原代雪旺細胞傳代后不增殖怎么辦?

    一般建議:

    1

    靜置培養細胞,細胞在穩定環境下更易生長,一般3-5天可有變化;

    2

    調整細胞密度,控制在70%-80%,更利于細胞生長;

    3

    補加適量血清促進細胞增殖,或更換質量更高的血清,提高營養因子促進細胞生長。雪旺細胞分離初期1-2周是處于停止增殖狀態的,度過該時期才會增殖。


    原代細胞的紅細胞較多怎么辦?需要紅細胞裂解液嗎?

    分離初期紅細胞較多,可用淋巴細胞分離液或Percoll分離液分離,也可用裂解液處理。


    原代分離肺動脈平滑肌細胞,酶消化法和貼壁法,哪個更好呢?

    貼壁法細胞爬出慢,周期長,成功率不高耗費時間,得到的細胞活性相對高;消化法,速度快,數量多,剛分離的活性差一點,后期培養要適應,看自主需求選擇。


    干細胞傳代次數有限制嗎?

    理論上無傳代次數限制,實際培養中,受離體培養環境變化、血清質量、培養基質量、傳代損傷等外部培養環境影響,細胞超過10代以上會出現分化、不增殖、老化凋亡等問題,所以常規建議10代以內使用。


    我們取的骨骼肌衛星細胞,在大皿養沒事,一換液就漂,是啥原因?

    骨骼肌衛星細胞,本身貼壁性不強,易漂浮,特別是局部密度大會導致細胞聚集成束,最后分化形成肌管束,建議培養中均勻接種,包被增強吸附性,控制密度在70-80%。


    脂肪細胞原代培養分離細胞時,沒有細胞怎么辦?

    脂肪細胞原代培養沒分出細胞,一是要檢查分離方法是否正確,中間每一步操作最好進行鏡檢,可以找出是哪一步損失細胞的,二是考慮后面離心步驟是否損失細胞,細胞包含脂滴,密度較小,漂浮丟棄了也有可能。



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